Olbaltumvielu pētīšanas metodes
Kā vienu no visbiežāk pētītajām bioloģiskajām molekulām, olbaltumvielu aktivitātes, un struktūra tiek pētīta gan in vivo, gan in vitro. In vivo no latīņu val. – organisma līmenī, in vitro – laboratorijas apstākļos.
Attīrītu olbaltumvielu pētījumi kontrolētā vidē ir svarīgi, lai izprastu, kā tās funkcionē.
Pētījumi in vivo - proteīnu aktivitātes šūnās vai pat visā organismā – var sniegt papildu informāciju par to, kādas ir proteīnu funkcijas, kur tās notiek un kā tiek regulētas.
Olbaltumvielu attīrīšana
Lai veiktu in vitro analīzes, olbaltumvielām jābūt attīrītām no citiem šūnveida komponentiem. Šis process parasti sākas ar šūnu-līzi, kuras laikā šūnas membrāna tiek pārrauta un tās iekšējais saturs izplūst šķīdumā.
Iegūtais maisījums var tikt attīrīts, izmantojot ultracentrifugāciju, kas sadala dažādus šūnas komponentus šķīstošas olbaltumvielas saturošās frakcijās: membrāna, lipīdi un olbaltumvielas, šūnu organoīdi un nukleīnskābes.
Šūnu lokalizēšana
Olbaltumvielu pētīšana in vivo bieži ir saistīta olbaltumvielas sintēzi un lokalizāciju šūnā.
Vienā no veidiem, lai novērtētu šūnu lokalizāciju, tiek izmantota gēnu inženierija – šūnā tiek ievadīta kombinēta olbaltumviela – himera, kas satur dabisku pētāmo olbaltumvielu, savienotu ar referenta gēnu, piem., zaļā fluorescējošā olbaltumviela
Pētāmās olbaltumvielas pozīciju šūnā var kvalitatīvi vizualizēt, izmantojot mikroskopiju.
…
